PgP - o46 Quantificação de ácidos lipoteicóicos na matriz extracelular de biofilmes cariogênicos - Pedraza, Midian Clara Castillo; Novais, Tatiana Fernanda; Klein, Marlise Inêz (ARCHIVES OF HEALTH INVESTIGATION, 2016)
Os exopolissacarídeos são componentes fundamentais na construção da matriz extracelular (MEC) de biofilmes cariogênicos. Porém, ácidos lipoteicóicos extracelulares (ALT) e DNA extracelular (eDNA) também podem ser detectados na MEC e portanto, ter papel importante na construção da matriz e desse biofilme. O objetivo foi desenvolver um método efetivo para quantificação de ALT na matriz extracelular de biofilmes cariogênicos. Biofilmes monoespécie de Streptococcus mutans UA159 e mistos (com UA159 cepa parental ou mutantes, Actinomyces naeslundii ATCC12104 e Streptococcus gordonii DL-1) foram formados sobre discos de hidroxiapatita, com película, em meio com saliva e 0,1% de sacarose, alternado com 0,5% sacarose + 1% amido (37°C/ 5%CO2). Para modular os componentes da matriz foram utilizadas cepas mutantes knockout de S. mutans dos genes lytTS (DSMU.525 e DSMU.526 - eDNA), do operon dltABCD (DSMU.1538 e DSMU.1541 – ácido lipoteicóicos) e gtfB (exopolissacarídeos insolúveis). Na idade 115 h, cada biofilme foi processado e a porção solúvel da MEC foi tratada com 5% de ácido tricloroacético para isolamento de ALT, que foi detectado e quantificado via ELISA. Para tanto, amostras de ALT foram imobilizadas em microplacas, seguida de incubações com anticorpo primário (MA1-7402) e secundário conjugado com HRP (A16072), sendo revelado com H2O2 e leitura a 405 nm. Observou-se uma tendência de maior quantidade de ALT na MEC de biofilmes monoespécie sendo maior a cepa parental, e mutantes gtfB e as cepas associadas ao ALT (operon dltABCD). A menor quantidade foi detectada para cepas mutantes dos genes lytTS(sendo 73-75% vs. cepa parental). O comportamento foi similar para o biofilme misto, mas com menor quantidade que a detectada em biofilmes monoespécies. Portanto, o método desenvolvido para processar, detectar e quantificar o ALT foi efetivo. Descritores: Streptococcus mutans; Ácidos Lipoteicóicos; Matriz Extracelular. Agradecimentos/Apoio Financeiro: FAPESP (Processos 2014/05423-0 e 2014/21355-4)