Efeitos anticoagulante e antitrombótico de inibidores proteolíticos vegetais - Maria Luiza Vilela Oliva, Silvana Cristina Pando, Mirian Daiane de Oliveira, Bruno Salu, Luiz Gustavo Bernardes, (ARCHIVES OF HEALTH INVESTIGATION, 2019)
Os inibidores proteolíticos são metabólitos importantes em decorrência das múltiplas funções que exercem, destacando a sua relevância para a regulação da cascata de coagulação sanguínea e fibrinólise. A caracterização estrutural desses inibidores poderá contribuir tanto para a elucidação dos mecanismos de regulação desses processos como para a demonstração do seu potencial de aplicabilidade terapêutica. Os inibidores mais bem estudados são do tipo Kunitz e Bowman-Birk e são classificados de acordo com a especificidade pelas enzimas alvo, presença de pontes dissulfeto e número de sítios reativos. O objetivo do trabalho foi investigar o efeito de dois inibidores proteolíticos isolados de plantas, designados CfTI e DrTI, sobre o processo de coagulação sanguínea e sistema fibrinolítico. Os inibidores foram extraídos por meio de solução salina e precipitação com acetona gelada 80% e, posteriormente, purificados em colunas cromatográficas. O monitoramento do grau de pureza foi realizado por eletroforese em gel de poliacrilamida. A atividade inibitória foi realizada em condições padronizadas, na presença de substratos cromogênicos específicos. A ação dos inibidores na via extrínseca e intrínseca/comum, foi verificada pela realização dos ensaios TTPa e TP, como descrito na literatura. O efeito de DrTI em um modelo de trombose arterial carotídea foi avaliado em camundongos machos pretos C57/BL6, tratados com 0,5 mg/Kg e 2 mg/Kg de DrTI, utilizando a emissão laser até atingir 0,03 mL/min ou menos. Todos os experimentos foram realizados de acordo com as normas do COBEA e aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UNIFESP - CEP 0193/06. A análise estatística foi realizada pelo método não paramétrico, empregando o teste Kruskal-Wallis e comparações múltiplas Dunn’s (P < 0.05). O tempo de oclusão arterial total foi registrado. Os resultados revelaram que ambos inibidores apresentaram massa molecular aparente de 20 kDa. CfTI e DrTI inibem tripsina mas não quimotripsina; sendo DrTI específico para calicreína plasmática humana e FXIa, mas não para FXa e plasmina. Ficou evidenciado que ambos os inibidores atuam sobre a via intrínseca e comum da coagulação sanguínea. O DrTI inibiu a agregação plaquetária e potencialmente preveniu a formação de trombos em camundongo. O CfTI e DrTI são inibidores tipo Kunitz, seletivos para serino proteases e ambos atuam na cascata de coagulação sanguínea sendo o DrTI também eficaz na formação de trombos. Descritores: Inibidores; Serinoproteases; Coagulação Sanguínea.